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用這個(gè)方法處理酶聯(lián)免疫試劑盒的標(biāo)本,效果更好

發(fā)布時(shí)間: 2022-09-20  點(diǎn)擊次數(shù): 1079次
  酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)中每一個(gè)步驟都尤為重要,細(xì)節(jié)不容忽視,它是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與否;在這里我司為方便各位了解,更好的完成實(shí)驗(yàn),對(duì)酶聯(lián)免疫試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理和標(biāo)本處理做出以下分析,供大家參考。

  酶聯(lián)免疫試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理:
  用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

  適用領(lǐng)域:
  1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
  2、研究抗酶抗體的合成。
  3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
  4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。

  酶聯(lián)免疫試劑盒的標(biāo)本處理:
  1、實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2);
  2、若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本;
  3、使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差;
  4、若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況;
  5、某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出;
  6、建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。

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