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SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞

SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞

簡要描述:SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞
SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個拷貝的二硫鍵異構(gòu)酶 DsbC基因 ,可以促進含有二硫鍵蛋白的正確折疊;此外DsbC還是一個分子伴侶,可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊,形成正確構(gòu)象,同時該菌株可降低目的基因的本底表達,適合于毒性基因的原核表達。

更新時間:2022-01-20

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù):2817

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86093
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86093-01(10×100ul)/BFNC86093-02(50×100ul)


SHuffle T7 E. coli:                                           100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期):                                   -80℃(6個月)



基因型

F′ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq) ΔtrxBrpsL150(StrR)Δgor Δ(malF)3


產(chǎn)品說明



SHuffle T7 E. coli菌株是K12的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個拷貝的二硫鍵異構(gòu)酶 DsbC基因 ,可以促進含有二硫鍵蛋白的正確折疊;此外DsbC還是一個分子伴侶,可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊,形成正確構(gòu)象,同時該菌株可降低目的基因的本底表達,適合于毒性基因的原核表達。SHuffle T7 E. coli菌株染色體中整合了一個拷貝的T7 RNA 聚合酶基因,可以表達噬菌體T7 RNA聚合酶,適合于T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達;該菌株還可以表達大腸桿菌RNA聚合酶,所以可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。SHuffle T7 E. coli菌株具有抗T1 噬菌體感染的特點,具有鏈霉素,壯觀霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達108 cfu/μg DNA。



操作方法

1. SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。



SHuffle T7 E. coli感受態(tài)細胞


IPTG配制:

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.




注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-10 mM均可)。

4. 為獲得需要量的蛋白,誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

5. SHuffle T7 E. coli 菌株具有鏈霉素,壯觀霉素抗性,不可用于具有鏈霉素,壯觀霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。





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